aa2ar_human

NAME

5K2D

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

aa2ar_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
                  
TM1              
M
P
I
M
G
S
S
V
Y
I
10
                   
                   
T
V
E
L
A
I
A
V
L
A
20
                   
                   
I
L
G
N
V
L
V
C
W
A
30
                   
        ICL1    
V
W
L
N
S
N
L
Q
N
V
40
                   
TM2              
T
N
Y
F
V
V
S
L
A
A
50
                   
                   
A
D
I
A
V
G
V
L
A
I
60
                   
                   
P
F
A
I
T
I
S
T
G
F
70
                   
ECL1 TM3      
C
A
A
C
H
G
C
L
F
I
80
                   
                   
A
C
F
V
L
V
L
T
Q
S
90
                   
                   
S
I
F
S
L
L
A
I
A
I
100
                   
                   
D
R
Y
I
A
I
R
I
P
L
110
                   
ICL2     TM4  
R
Y
N
G
L
V
T
G
T
R
120
                   
                   
A
K
G
I
I
A
I
C
W
V
130
                   
                   
L
S
F
A
I
G
L
T
P
M
140
                   
    ECL2        
L
G
W
N
N
C
G
Q
P
K
150
                   
                   
E
G
K
N
H
S
Q
G
C
G
160
                   
                   
E
G
Q
V
A
C
L
F
E
D
170
                   
    TM5          
V
V
P
M
N
Y
M
V
Y
F
180
                   
                   
N
F
F
A
C
V
L
V
P
L
190
                   
                   
L
L
M
L
G
V
Y
L
R
I
200
               
 
 
                   
F
L
A
A
R
R
Q
L
K
Q
210
 
 
 
 
 
 
 
 
    
      ICL3      
M
E
S
Q
P
L
P
G
E
R
220
                   
TM6              
A
R
S
T
L
Q
K
E
V
H
230
                   
                   
A
A
K
S
L
A
I
I
V
G
240
                   
                   
L
F
A
L
C
W
L
P
L
H
250
                   
                   
I
I
N
C
F
T
F
F
C
P
260
                   
ECL3   TM7    
D
C
S
H
A
P
L
W
L
M
270
                   
                   
Y
L
A
I
V
L
S
H
T
N
280
                   
                   
S
V
V
N
P
F
I
Y
A
Y
290
                   
  H8              
R
I
R
E
F
R
Q
T
F
R
300
                   
                   
K
I
I
R
S
H
V
L
R
Q
310
           
 
 
 
 
        C-term
Q
E
P
F
K
A
A
G
T
S
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
R
V
L
A
A
H
G
S
D
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
G
E
Q
V
S
L
R
L
N
G
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
H
P
P
G
V
W
A
N
G
S
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
P
H
P
E
R
R
P
N
G
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Y
A
L
G
L
V
S
G
G
S
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
Q
E
S
Q
G
N
T
G
L
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
D
V
E
L
L
S
H
E
L
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
G
V
C
P
E
P
P
G
L
400
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
D
P
L
A
Q
D
G
A
G
410
 
 
   
V
S
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagglutin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
                  
  TM1            
 
P
I
M
G
S
S
V
Y
I
10
                   
                   
T
V
E
L
A
I
A
V
L
A
20
                   
                   
I
L
G
N
V
L
V
C
W
A
30
                   
        ICL1    
V
W
L
N
S
N
L
Q
N
V
40
                   
TM2              
T
N
Y
F
V
V
S
L
A
A
50
                   
                   
A
D
I
A
V
G
V
L
A
I
60
                   
                   
P
F
A
I
T
I
S
T
G
F
70
                   
ECL1 TM3      
C
A
A
C
H
G
C
L
F
I
80
                   
                   
A
C
F
V
L
V
L
T
Q
S
90
                   
                   
S
I
F
S
L
L
A
I
A
I
100
                   
                   
D
R
Y
I
A
I
R
I
P
L
110
                   
ICL2     TM4  
R
Y
N
G
L
V
T
G
T
R
120
                   
                   
A
K
G
I
I
A
I
C
W
V
130
                   
                   
L
S
F
A
I
G
L
T
P
M
140
                   
    ECL2        
L
G
W
N
N
C
G
Q
P
K
150
                   
                   
E
G
K
N
H
S
Q
G
C
G
160
                   
                   
E
G
Q
V
A
C
L
F
E
D
170
                   
    TM5          
V
V
P
M
N
Y
M
V
Y
F
180
                   
                   
N
F
F
A
C
V
L
V
P
L
190
                   
                   
L
L
M
L
G
V
Y
L
R
I
200
               
 
                 
F
L
A
A
R
R
Q
L
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (b562R
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
               
TM6          
E
R
A
R
S
T
L
Q
226
                   
                   
K
E
V
H
A
A
K
S
L
A
236
                   
                   
I
I
V
G
L
F
A
L
C
W
246
                   
                   
L
P
L
H
I
I
N
C
F
T
256
                   
      ECL3      
F
F
C
P
D
C
S
H
A
P
266
                   
TM7              
L
W
L
M
Y
L
A
I
V
L
276
                   
                   
S
H
T
N
S
V
V
N
P
F
286
                   
          H8      
I
Y
A
Y
R
I
R
E
F
R
296
                   
                   
Q
T
F
R
K
I
I
R
S
H
306
                   
 
                     
V
L
R
Q
Q
E
P
F
K
A
 
316
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
 
TM5
 
 
 
 
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagg
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
C-term 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10


DIAGRAMS

ICL1 S N L Q ICL1ECL1 F C A ECL1ICL2 P L R Y N G L V ICL2ECL2 W N N C G Q P K E G K N H S Q G C G E G Q V A C L F E D V V ECL2ICL3 Q P L P G ICL3ECL3 P D C S H A ECL3C-term K A A G T S A R V L A A H G S D G E Q V S L R L N G H P P G V W A N G S A P H P E R R P N G Y A L G L V S G G S A Q E S Q G N T G L P D V E L L S H E L K G V C P E P P G L D D P L A Q D G A G V S C-term M P I M G S S V Y I T V E L A I A V L A I L G N V L V C W A V W L N N V T N Y F V V S L A A A D I A V G V L A I P F A I T I S T G A C H G C L F I A C F V L V L T Q S S I F S L L A I A I D R Y I A I R I T G T R A K G I I A I C W V L S F A I G L T P M L G P M N Y M V Y F N F F A C V L V P L L L M L G V Y L R I F L A A R R Q L K Q M E S E R A R S T L Q K E V H A A K S L A I I V G L F A L C W L P L H I I N C F T F F C P L W L M Y L A I V L S H T N S V V N P F I Y A Y R I R E F R K H V L P F F R Q T I I R S R Q Q E

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 1
  • from 209 to 218
  • from 317 to 412

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: signal

    Name: hemagglutinin
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: BRIL (b562RIL)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_2 209:218
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_3 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect Bac-to-Bac

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    additive CHS 0.2 %w/v
    detergent DDM 1.0 % w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 60 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 5.0-5.0

    Remarks: The protein-LCP mixture contained 40% (w/w) protein solution, 54% (w/w) monoolein (Sigma), and 6% (w/w) cholesterol (Sigma).After crystals had formed, excess precipitant solution was carefully removed, followed by the addition of ~3 ml of 7.9 MAG (monoacylglycerol) (36). The 7.9 MAG was used to prevent the appearance of a lipidic lamellar crystal phase due to rapid dehydration and cooling upon injection of LCP into vacuum (10-4 torr).

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Lipid
    lipid CHS 0.002 %w/v
    Detergent
    DDM 0.01 %w/v
    Additional
    PEG-400 28 %v/v
    sodium thiocyanate 40 mM
    sodium citrate (pH 5.0) 100 mM