ffar1_human

NAME

5KW2

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

ffar1_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

                   
N-term TM1  
M
D
L
P
P
Q
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S
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G
10
                   
                   
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40
 
 
                
TM2              
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50
                   
                   
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70
                   
ECL1 TM3      
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ICL2            
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TM4              
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130
                   
                   
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            ECL2
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        TM5      
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  ICL3   TM6  
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ECL3 TM7      
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H8                
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        C-term
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300
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
                   
N-term TM1  
M
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10
                   
                   
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TM2              
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ECL1 TM3      
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ICL2            
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TM4              
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        TM5      
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190
                   
                   
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GS                
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                
ICL3 TM6    
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ECL3 TM7      
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    C-term
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His(8)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
 
 
TM2
 
ECL1
 
 
 
 
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
TM5
 
 
 
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
 
 
TM2
 
ECL1
 
 
 
 
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GS
 
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)


DIAGRAMS

ICL1 L ICL1ECL1 G A W P L ECL1ICL2 P L G Y Q A F R ICL2ECL2 P G G W L D H S N T S L G I N T P V N G S P V C L E A W ECL2ICL3 S G L T H ICL3ECL3 P N L G ECL3N-term M D L N-termC-term G G K S Q K C-term P P Q L S F G L Y V A A F A L G F P L N V L A I R G A T A H A R L R T P S L V Y A L N L G C S D L L L T V S L P L K A V E A L A S P A S L C P V F A V A H F F P L Y A G G G F L A A L S A G R Y L G A A F R P C Y S W G V C A A I W A L V L C H L G L V F G L E A D P A S A G P A R F S L S L L L F F L P L A I T A F C Y V G C L R A L A R R R K L R A A W V A G G A L L T L L L C V G P Y N A S N V A S F L Y G S W R K L G L I T G A W S V V L N P L V T G Y L G R G T V C Q P G L K A A R T

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated
42 |  L A
88 |  F A
103 |  G A
202 |  Y F

DELETIONS

  • from 212 to 213

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: linker

    Name: GS
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_1 212:212
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: T4 Lysozyme (T4L)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_2 213:214
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: linker

    Name: GS
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_3 213:213
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(8)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect Bac - to - Bac Baculovirus Expression System (Invitrogen)

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 200.0 mM
    additive CHS 2 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by TEV protease None
    Deglycosylation by PNGase F None
    Detergent DDM exchanged with LMNG None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 60-80 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 8.5-8.5

    Remarks: synthetic full agonist bound at allosteric site near ICL2

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    LMNG 0.01 % w/v
    Lipid
    CHS 0.001 % w/v
    Additional
    PEG 400 30.0 %v/v
    Ammonium formate 0.2 M
    Tris- HCl, pH 8.5 0.1 M