oprm_mouse

NAME

6DDE

ORGANISM

Mouse (Mus musculus)

PROTEIN NAME

oprm_mouse

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
    
N-term        
M
D
S
S
A
G
P
G
N
I
10
                   
                   
S
D
C
S
D
P
L
A
P
A
20
                   
                   
S
C
S
P
A
P
G
S
W
L
30
                   
                   
N
L
S
H
V
D
G
N
Q
S
40
                   
                   
D
P
C
G
P
N
R
T
G
L
50
                   
                   
G
G
S
H
S
L
C
P
Q
T
60
     
 
            
        TM1      
G
S
P
S
M
V
T
A
I
T
70
                   
                   
I
M
A
L
Y
S
I
V
C
V
80
                   
                   
V
G
L
F
G
N
F
L
V
M
90
                   
            ICL1
Y
V
I
V
R
Y
T
K
M
K
100
                   
TM2              
T
A
T
N
I
Y
I
F
N
L
110
                   
                   
A
L
A
D
A
L
A
T
S
T
120
                   
                   
L
P
F
Q
S
V
N
Y
L
M
130
                   
  ECL1 TM3    
G
T
W
P
F
G
N
I
L
C
140
                   
                   
K
I
V
I
S
I
D
Y
Y
N
150
                   
                   
M
F
T
S
I
F
T
L
C
T
160
                   
                   
M
S
V
D
R
Y
I
A
V
C
170
                   
  ICL2          
H
P
V
K
A
L
D
F
R
T
180
                   
TM4              
P
R
N
A
K
I
V
N
V
C
190
                   
                   
N
W
I
L
S
S
A
I
G
L
200
                   
            ECL2
P
V
M
F
M
A
T
T
K
Y
210
                   
                   
R
Q
G
S
I
D
C
T
L
T
220
                   
      TM5        
F
S
H
P
T
W
Y
W
E
N
230
                   
                   
L
L
K
I
C
V
F
I
F
A
240
                   
                   
F
I
M
P
V
L
I
I
T
V
250
                   
                   
C
Y
G
L
M
I
L
R
L
K
260
                   
    ICL3   TM6
S
V
R
M
L
S
G
S
K
E
270
                   
                   
K
D
R
N
L
R
R
I
T
R
280
                   
                   
M
V
L
V
V
V
A
V
F
I
290
                   
                   
V
C
W
T
P
I
H
I
Y
V
300
                   
            ECL3
I
I
K
A
L
I
T
I
P
E
310
                   
TM7              
T
T
F
Q
T
V
S
W
H
F
320
                   
                   
C
I
A
L
G
Y
T
N
S
C
330
                   
                   
L
N
P
V
L
Y
A
F
L
D
340
                   
H8                
E
N
F
K
R
C
F
R
E
F
350
               
 
 
    C-term    
C
I
P
T
S
S
T
I
E
Q
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Q
N
S
A
R
I
R
Q
N
T
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
R
E
H
P
S
T
A
N
T
V
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
R
T
N
H
Q
L
E
N
L
390
 
 
 
 
 
 
 
 
               
E
A
E
T
A
P
L
P
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
                  
  N-term      
 
N
I
S
D
C
S
D
P
L
17
                   
                   
A
P
A
S
C
S
P
A
P
G
27
                   
                   
S
W
L
N
L
S
H
V
D
G
37
                   
                   
N
Q
S
D
P
C
G
P
N
R
47
                   
                   
T
G
L
G
G
S
H
S
L
C
57
           
           
P
Q
T
G
S
P
63
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                
  TM1          
S
M
V
T
A
I
T
I
M
72
                   
                   
A
L
Y
S
I
V
C
V
V
G
82
                   
                   
L
F
G
N
F
L
V
M
Y
V
92
                   
        ICL1    
I
V
R
Y
T
K
M
K
T
A
102
                   
TM2              
T
N
I
Y
I
F
N
L
A
L
112
                   
                   
A
D
A
L
A
T
S
T
L
P
122
                   
                   
F
Q
S
V
N
Y
L
M
G
T
132
                   
ECL1 TM3      
W
P
F
G
N
I
L
C
K
I
142
                   
                   
V
I
S
I
D
Y
Y
N
M
F
152
                   
                   
T
S
I
F
T
L
C
T
M
S
162
                   
                   
V
D
R
Y
I
A
V
C
H
P
172
                   
ICL2       TM4
V
K
A
L
D
F
R
T
P
R
182
                   
                   
N
A
K
I
V
N
V
C
N
W
192
                   
                   
I
L
S
S
A
I
G
L
P
V
202
                   
        ECL2    
M
F
M
A
T
T
K
Y
R
Q
212
                   
                   
G
S
I
D
C
T
L
T
F
S
222
                   
  TM5            
H
P
T
W
Y
W
E
N
L
L
232
                   
                   
K
I
C
V
F
I
F
A
F
I
242
                   
                   
M
P
V
L
I
I
T
V
C
Y
252
                   
                   
G
L
M
I
L
R
L
K
S
V
262
                   
ICL3   TM6    
R
M
L
S
G
S
K
E
K
D
272
                   
                   
R
N
L
R
R
I
T
R
M
V
282
                   
                   
L
V
V
V
A
V
F
I
V
C
292
                   
                   
W
T
P
I
H
I
Y
V
I
I
302
                   
        ECL3    
K
A
L
I
T
I
P
E
T
T
312
                   
TM7              
F
Q
T
V
S
W
H
F
C
I
322
                   
                   
A
L
G
Y
T
N
S
C
L
N
332
                   
              H8  
P
V
L
Y
A
F
L
D
E
N
342
                   
                   
F
K
R
C
F
R
E
F
C
I
352
           
 
C-term
P
T
S
S
T
I
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(6)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
      
 
  
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
C-term 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(6)


DIAGRAMS

ICL1 T K M K ICL1ECL1 T W P F ECL1ICL2 P V K A L D F R ICL2ECL2 T T K Y R Q G S I D C T L T F S H ECL2ICL3 R M L S G ICL3ECL3 T I P E ECL3N-term M D S S A G P G N I S D C S D P L A P A S C S P A P G S W L N L S H V D G N Q S D P C G P N R T G L G G S H S L C P Q T G S P S N-termC-term P T S S T I E Q Q N S A R I R Q N T R E H P S T A N T V D R T N H Q L E N L E A E T A P L P C-term M V T A I T I M A L Y S I V C V V G L F G N F L V M Y V I V R Y T A T N I Y I F N L A L A D A L A T S T L P F Q S V N Y L M G G N I L C K I V I S I D Y Y N M F T S I F T L C T M S V D R Y I A V C H T P R N A K I V N V C N W I L S S A I G L P V M F M A P T W Y W E N L L K I C V F I F A F I M P V L I I T V C Y G L M I L R L K S V S K E K D R N L R R I T R M V L V V V A V F I V C W T P I H I Y V I I K A L I T T F Q T V S W H F C I A L G Y T N S C L N P V L Y A F L D E N F R E F K R C F C I

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 8
  • from 359 to 398

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_0 64:64
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: PreScission site
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_2 359:359
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(6)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_3 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect BestBac

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent LMNG 0.1 %w/v
    additive CHS 0.001 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by TEV protease None
    Proteolysis by HRV 3C protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: Cryo-EM
    TYPE: Gatan K2 Summit direct electron camera , 300kV ()
    PROTEIN CONCENTRATION: 7.0 mg/ml
    Temperature: 4°C
    ph : 7.5-7.5

    Remarks: nucleotide free Gi, with Fab scFv16

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    LMNG 0.00075 %v/v
    Lipid
    CHS 0.0001 %v/v
    Additional
    Buffer Hepes pH 7.5 20.0 mM
    NaCl 100.0 mM
    glyco-diosgenin (GDN) 0.00025 %v/v